特殊生物的超低溫保存法

更新時(shí)間：2019-08-29

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1.大多數(shù)微生物可用超低溫保存，超低溫保存法是適用范圍廣的微生物保存法：

通常可用超低溫的方法保存（ATCC 1983；Halliday，Baker 1985）。此法是將凍存在小管或安瓿里的細(xì)胞以較慢的冷凍速率（1℃／分鐘）冷凍，直至—150℃，再將這些小管貯存在—150～－196℃的液氮中。

超低溫保藏的微生物必須始終貯存在溫度非常低的環(huán)境中，因此需要液氮罐。

在長期貯存的過程中必須經(jīng)常注意補(bǔ)充液氮。這種貯存方式比凍干法需要更多的經(jīng)費(fèi)，包括為了維持貯存溫度所必要的勞動(dòng)力和液氮等。
2 材料
病毒超低溫保存所需材料有：熱收縮塑料管（Nunc Cryoflex），液氮罐，防護(hù)手套和面罩，久性記號(hào)筆，氣體噴燈，裝液氮的保溫瓶。
3 方法
（1）剪一段兩端各超出冷凍管長度2cm 的熱收縮塑料管。
（2）將含有澄清病毒懸液（組織培養(yǎng)的上清培養(yǎng)基，或組織培養(yǎng)基內(nèi)的細(xì)胞溶解產(chǎn)物均可）冰浴幾分鐘，用滅菌移液管將0.2ml 冰浴過的上清懸液分裝到冷凍管內(nèi)，并將蓋子擰緊。
（3）將有病毒的冷凍管放入熱收縮塑料管中部，插入正確的標(biāo)簽。
（4）用噴燈小心加熱熱收縮塑料管，并使之包住冷凍管。注意不要用太高的溫度加熱熱收縮塑料管。

（5）再小心加熱熱收縮塑料管的兩端，用大號(hào)鑷子夾緊管的端口至*密封。
（6）將密封好的冷凍管快速在裝有液氮的保溫瓶中冷凍（操作時(shí)要求戴面罩和手套）。
（7）將冷凍過的冷凍管放入液氮罐中的格子內(nèi)，同時(shí)記錄樣品的詳細(xì)的存放位置、實(shí)驗(yàn)編號(hào)和存放日期等。
（8）需要用時(shí)，迅速從液氮罐內(nèi)取出所需樣品，并投入37℃水浴箱中解凍后，用解剖刀片在冷凍管的硅化墊圈處切開熱收縮塑料管。擰開冷凍管的蓋子時(shí)不需要除去熱收縮塑料管。

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